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實驗方法——抗體檢測常用的幾種方法

一、直接法

將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。

1. 優(yōu)勢：操作手續(xù)簡略，因無須運(yùn)用二抗可防止交互反響。

2. 缺陷：實驗中的一抗都得用酶符號，但不是每種抗體都適合做符號，費(fèi)用相對進(jìn)步。

二、間接法

此測定辦法與直接法相似，不一樣在于一級抗體沒有酶符號，改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。

1. 優(yōu)勢：二抗能夠加強(qiáng)信號，并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它多的免疫反響性。

2. 缺陷：交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。

三、雙抗體夾心法

被檢測的抗原包被在兩個抗體之間，其間一個抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體，此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量;或不符號，再透過酶符的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選擇，才可防止交互反響或競爭一樣的抗原部位。

1. 優(yōu)勢：高活絡(luò)、高專一性，抗原無須事前純化。

2. 缺陷：抗原必定得具有兩個以上的抗體部位。

四、根據(jù)細(xì)胞法(xin ELISA技術(shù)) 是一種新的定性蛋白檢測技術(shù)，將細(xì)胞直接在微孔板里培育，待檢測時，不需抽提蛋白和裂解細(xì)胞，便可直接丈量微孔板里蛋白經(jīng)影響或抑制作用后的改變。

1. 優(yōu)勢：無需裂解細(xì)胞，所以方針蛋白丟失zui少，可測定完好細(xì)胞、黏附細(xì)胞、還有非粘附細(xì)胞。

2. 缺陷：不能測定抗原量。

五、競爭法

樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競爭一樣的抗體，當(dāng)樣品里的自在抗原越多，就能夠越多的抗體，而固定抗原就只能到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清潔過程，洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物，只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物，拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬，依據(jù)呈色區(qū)別就可計算出樣品里的抗原含量。

1. 優(yōu)勢：可適用比擬不純的樣本，并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。

2. 缺陷：全體的敏感性和專一性都較差。